alserv.ru

Пцр гепатит с количественный расшифровать

Количественный анализ на гепатит Ц

Ведущий метод диагностики воспаления печени — количественный анализ на гепатит С. Определение болезни подразумевает проведение количественного, качественного анализа с проверкой генотипа вируса, что дает возможность определить основные параметры течения заболевания. Ввиду способности к мутации требуется точное и своевременное диагностирование с правильно расшифровкой данных для разработки терапевтической схемы.

С 2012 года болезнь гепатита C официально считается полностью излечимым заболеванием. Но для этого важна своевременная диагностика.

Что такое ПЦР?

Полимеразная цепная реакция или же ПЦР — метод, позволяющий выявить гепатит на начальных стадиях. Чувствительность немного ниже ИФА. Метод определяет ДНК- фрагменты вируса в пробе крови пациента даже в малых количествах. Исходя из этого врач правильно вычисляет именно возбудителя инфекции, а не его продукты жизнедеятельности. По результатам анализа ПЦР есть возможность выявить даже следы вируса и его генотип.

Видовое разнообразие анализов

В ПЦР выделяют 3 вида анализа:

  • Качественный. ПЦР гепатита С, который основывается на поиске иммуноглобулинов (антител) типа M и G, характеризующих факт заражения. Анализ может выдать — «не обнаружено», что будет считаться нормой.
  • Количественный. Подтверждает диагноз, позволяет контролировать лечение, указывает на риск заражения других людей. Определяется количество в международной системе единиц — МЕ/мл. Показатель рассчитывается из количества РНК-вируса в 1 мл пробы крови. Высокий результат указывает на повышенный риск инфицирования других людей.
  • Генотипирование. Метод, основывающийся на выявлении генотипов HCV, которых насчитывается 7.

Перед сдачей крови на проверку важно придерживаться правил:

  • За 8 часов до анализов в последний раз покушать.
  • Не пить спиртного за 2 дня, желательно не курить в это время или хотя бы за 1—2 часа до.
  • Сообщить о приеме лекарств.

Вернуться к оглавлению

Показания к применению

Для проведения количественного метода исследования нужен ряд показаний, без которых эта диагностика невозможна. К ним относится:

  • выявление качественным анализом антител РНК-вируса;
  • присутствие хронического или острого вида заболевания;
  • планирование тактики лечения;
  • обнаружение микст-гепатитов при диагностировании.

Вернуться к оглавлению

Как проводится количественный ПЦР?

Определение концентрации патогена — суть исследования. Диагностика определяет степень тяжести заболевания, что позволяет полностью увидеть клиническую картину болезни. С помощью это вида ПЦР обнаруживают, какая вирусная нагрузка при гепатите С. После проведения расшифровки полученных данных анализа, врачи назначают лечение, в ходе которого делают забор крови на 4, 12, 16 и 24-й неделях. По завершении 12-й должно быть улучшение, в обратном случае метод лечения стоит заменить.

Расшифровка

Найденное в крови количество HCV, влияет на вероятность, с которой вирус гепатита передается окружающим — чем выше, тем больше вероятность. За счет этой процедуры составляется правильный план дальнейшего лечения. Полученные в ходе процедуры результаты измеряются в единицах МЕ/мл и копий/мл. Расшифровать показатели можно только после пересчета полученного количества с учетом коэффициента (КП). Есть 2 метода:

  • HCV Monitor с КП в МЕ — 2,7;
  • LCX HCV RNA с КП — 3,8.
Таблица № 2. Расшифровка результатов генотипирования:

Результаты Значение
Генотипы 1а, 1b Очень высокий риск хронизации инфекции и развития тяжелых осложнений
Генотипы 2, 3а В большинстве случаев в течение 24 недель достигается планированный терапевтический эффект
Генотип 4 Труднее поддается лечению, требует доз препаратов, отличных от применяемых при терапии с генотипами 2 или 3

Вернуться к оглавлению

Норма показателей

Нормой считается показатель число, которого равно нулю, что свидетельствует об отсутствие вируса в крови человека. Для зараженных людей понижение вирусной концентрации считается приближением к здоровому состоянию. Если показатели варьируются от 600 МЕ/мл до 3*10 в ст. 4 МЕ/мл, то применяемое лечение считается успешным.

Международный показатель — единица измерения, которая определяет количество РНК в 1 мл крови. Значение — признак риска заражения окружающих людей.

Отклонения и причины их возникновения

Если происходит изменения результатов и их выхождения за рамки нормы, значит, произошел рецидив. Это говорит о том, что заболевание снова прогрессирует и количество вируса в организме постепенно увеличивается. Результаты во многом зависят от тех, кто делает анализы. Ошибочные они в случае, если образец с кровью подвергся загрязнению или присутствовали ошибки в проведении анализа. Дополнительной причиной становится присутствие в крови веществ, направленных на замедление реакции ПЦР. Важно заметить, что для точного результата необходимы другие анализы: биопсия и биохимическое исследование.

Количественное определение РНК вируса гепатита С (HCV) методом ПЦР

Гепатит С часто протекает скрыто, без очевидных клинических проявлений. Чтобы определить наличие вируса в организме и поражение им печени требуется пройти соответствующее исследование — ПЦР количественный на гепатит С.

О чем я узнаю? Содержание статьи.

Что такое количественный ПЦР?

Количественный ПЦР — исследование крови или другой физиологической жидкости, которое позволяет определить количественную вирусную нагрузку на организм.

Заболевания, в зависимости от тяжести протекания, отражаются присутствием в крови определённого количества (мл на 1 см3) возбудителя инфекции. Каждый живой организм имеет в своём составе белки, рибонуклеиновую (РНК) и дезоксирибонуклеиновую (ДНК) кислоты.

Каждый вирус имеет характерные только для него РНК, ДНК, белки. Суть метода полимеразной цепной реакции в том, что он указывает количество РНК конкретного организма (например, вируса определённого генотипа) в 1 мл жидкости. Таким образом, выясняется степень и тяжесть заболевания.

При гепатите С, количественный ПЦР показывает сколько в исследуемом материале РНК вируса. Предварительно проводят качественный анализ, выясняя его наличие.

Из всех существующих способов определения возбудителя, а также его количества, полимеразная цепная реакция — наиболее точный метод. Он призван обнаружить сам вредоносный организм, а не последствия его пребывания (антитела).

Когда и кому необходимо сдавать количественный ПЦР на гепатит С?

Терапия любого заболевания допустима только после установления точного диагноза. Врач сбирает анамнез, оценивает клинические проявления недомогания, а также назначает дополнительные лабораторные обследования.

Прежде чем доктор поставит диагноз, подберёт лечение, необходимо количественное определение РНК вируса гепатита С. Этот анализ назначается не всем пациентам, а при конкретных показаниях:

  • контакт с больным гепатитом С;
  • симптомы заболевания печени;
  • клинические проявления цирроза;
  • в биохимическом анализе крови показатели активности АЛТ, АСТ выше нормы;
  • подозрение на инфицирование гепатитом С;
  • выявлены антитела к HCV при иммуноферментном исследовании крови;
  • уточнение диагноза;
  • определение вирусной нагрузки, чтобы доктор мог выбрать тактику, правильно составить схему лечения;
  • контроль эффективности проводимой терапии в динамике (1, 4, 12, 24 недели после начала лечения);
  • динамика протекания заболевания;
  • при подозрении на смешанные поражения железы;
  • по окончании лечения гепатита для периодической проверки, чтобы исключить рецидив.
Читать еще:  Сдать анализы на гепатиты

Как проходит обследование?

Чтобы сделать количественный ПЦР вирусной РНК гепатита С, надо соблюдать методику выполнения исследования:

  1. Лучше всего для тестирования подходит венозная кровь. Анализы сдаются натощак. Пациенту не рекомендуют есть жирную и жареную пищу, пить спиртное за два дня до манипуляции.
  2. После забора биологического материала, его доставляют в лабораторию, обрабатывают.
  3. ПЦР состоит из трёх этапов (подготовка, увеличение копий ДНК возбудителя, идентификация) на каждом из которых используется определённое оборудование и реактивы.
  4. Образцы, взятые для исследования, маркируются. Из них с помощью реагентов выделяют РНК вируса, обозначенного качественным ПЦР.
  5. Процесс амплификации (создание и увеличение копий) проходит несколько раз посредством изменения температуры материала (нагревания, охлаждения) с использованием реактивов.
  6. На последнем этапе происходит определение вирусной нагрузки. Результат исследования интерпретирует лечащий врач, у которого есть расшифровка, таблица значений и итоги предварительной диагностики.

Расшифровка результатов (таблица)

После количественной полимеразной цепной реакции, данные о вирусной нагрузке на печень и организм в целом отображают в бланке. Количество РНК возбудителя выражается как МЕ/мл (международные единицы/миллилитры). Данные обычно выводятся в виде таблицы, в которой представлены:

  • норма количественного ПЦР при гепатит С;
  • полученный результат;
  • другие параметры.

Значения показателей вирусной нагрузки при гепатите С

Показатель Интерпретация
Отрицательный РНК возбудителя в биологическом материале не обнаружено
0 — 1,8Х10^2МЕ/мл Количество генетического материала вируса ниже установленного референтного значения
1,8Х10^2МЕ/мл — 8Х10^5МЕ/мл Невысокая вирусная нагрузка.
8Х10^5МЕ/мл — 2,4Х10^7МЕ/мл Высокая вирусная нагрузка
2,4Х10^7МЕ/мл и более Превышена верхняя граница значений.

Показатели отчасти зависят от типа и чувствительности теста. Поэтому расшифровать результат анализа может только доктор, который учитывает все параметры.

Лечащий врач, исходя из результатов анализов, собранного анамнеза, клинических признаков подберёт противовирусную терапию. Интенсивность её будет зависеть от количества найденного генотипа вируса в образце.

Возможны ли ошибки при количественном ПЦР на гепатит С?

Любое лабораторное исследование может иметь погрешность, если не будут соблюдены условия его проведения на всех этапах (от подготовки к процедуре до интерпретации результатов). Количественная полимеразная цепная реакция – один из наиболее достоверных методов определения вирусной нагрузки. Но при нарушении методики она может давать ошибочные результаты, так как присутствует человеческий фактор.

Чтобы максимально избежать ложноположительных или неверных данных, требуется выполнять все необходимые требования диагностики:

  1. Прежде чем проводить количественный ПЦР рекомендуется провести иммунологическое исследование крови на выявление антител к гепатиту С. Кроме этого, требуется определить генотип вируса.
  2. Пациенту важно подготовиться к сдаче анализов в соответствии с рекомендациями. Чтобы уменьшить вероятность ошибки в тесте, надо сообщить лаборанту о приёме лекарств (если такой момент имеет место). На прохождение ПЦР влияет употребление запрещённой пищи, стресс, вредные привычки, физические нагрузки, различные заболевания.
  3. Лаборант, который обрабатывает образец биологического материала должен быть компетентен, знать методику проведения количественного ПЦР, а также работу оборудования. Правильная идентификация, подсчёт копий – основа верного результата
  4. Качество, способ, сроки хранения реактивов должны соответствовать заявленным требованиям.
  5. Соблюдение температурного режима на всех этапах реакции обязательно.

Правила и рекомендации по подготовке, сбору материала, проведения количественного ПЦР необходимо соблюдать для достижения 100% точности полученного результата. Ошибочные данные приводят к неправильному выбору тактики лечения и неэффективности терапии.

Что делать, если наличие РНК вируса подтвердилось?

При подозрении на инфицирование гепатитом С надо обязательно проконсультироваться с врачом. Если проведена диагностика, а ПЦР положительная или её количественные показатели говорят о наличии вирусной нагрузки, это однозначно повод безотлагательно посетить медучреждение.

Доктор, расшифровав результаты анализов, назначит лечение. Правильно выбранные лекарства, техника терапии, своевременное начало приёма медикаментов помогут избежать патологических изменений структуры и работы печени.

Гепатит С — тяжёлое вирусное заболевание, которое может привести к необратимым последствиям для человека. Ранняя, точная диагностика (количественный ПЦР) даёт возможность увеличить вероятность выздоровления в несколько раз.

Количественный анализ на гепатит С: как подготовиться, расшифровка, норма

Количественная ПЦР – молекулярно-биологический анализ, при котором подсчитывается количество генетического материала возбудителя в крови. Исследование на гепатит С (количественно) выполняется после подтверждения диагноза для определения вирусной нагрузки. Полимеразная цепная реакция характеризуется высокой специфичностью и чувствительностью. Поэтому анализ считается золотым стандартом в диагностике гепатита С.

Что такое количественный анализ на гепатит С

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – анализ, который основан на определении участков РНК или ДНК, специфичных для возбудителя инфекции. В качестве исследуемого материала чаще используется венозная кровь. Тест обладает высокой специфичностью, так как при исследовании плазмы выявляется генетический материал конкретного вируса.

Метод полимеразной цепной реакции впервые был запатентован в 1983 году Кэри Мюллисом. Внедрение в клиническую практику молекулярно-биологического анализа совершило переворот в диагностике бактериальных, грибковых и вирусных болезней.

ПЦР количественный при гепатите С – исследование, при котором подсчитывается количество РНК ВГС (HCV RNA). По результатам определяют вирусную нагрузку, от которой зависят:

  1. дозировка медикаментов;
  2. продолжительность противовирусной терапии (ПВТ);
  3. вероятность осложнений;
  4. успешность лечения.

РНК вируса гепатита С (ВГС) обнаруживается спустя 10-12 суток после заражения, когда до первых симптомов еще далеко. Поэтому исследование применяется для ранней диагностики HCV-инфекции.

Когда нужно сдать тест

Молекулярно-биологический анализ назначается при положительном результате скринингового обследования на гепатит – ИФА и качественной ПЦР. Исследование применяется для:

  • подтверждения диагноза;
  • определения уровня виремии (вирусной нагрузки);
  • прогнозирования течения болезни;
  • оценки результативности лечения;
  • диспансерного обследования после ПВТ.

ПЦР-диагностика рекомендована всем людям с вирусным гепатитом. Точность исследования варьируется в пределах 97-99%, поэтому риск ложных результатов минимален.

Показания для анализа:

  • обнаружение антител к вирусу гепатита С (anti-HCV);
  • признаки воспаления печени;
  • качественное выявление РНК ВГС;
  • острый и вялотекущий гепатит;
  • микст-гепатиты.

Количественный тест выполняется на всех этапах заболевания. Чтобы оценить результативность терапии, вирусную нагрузку определяют перед, во время и после ПВТ. Если уровень виремии высокий, увеличивается риск цирроза и рака печени. Поэтому для профилактики осложнений назначают антивирусные средства в больших дозах.

Подготовка и сдача крови

Количественный анализ ПЦР проводится в лабораторных условиях. Домашних тестов для выявления числа вирусов в крови не существует.

Объективность результатов зависит от правильности подготовки к исследованию. Чтобы снизить вероятность погрешностей, нужно:

  1. сдавать венозную кровь натощак;
  2. выполнять процедуру до 12 часов дня;
  3. не есть за полсуток до визита в лабораторию;
  4. отказаться от газированных напитков и кофе в день обследования.

Забор крови у женщин рекомендуется выполнять за 1-2 дня до менструации. В этот период иммунная защита ослабевает, поэтому сывороточная концентрация возбудителя максимальная.

За 5-7 суток до анализа исключают алкогольные напитки, жирную и острую пищу. Врачи не советуют курить за 2-3 часа до забора крови.

Точность ПЦР-диагностики на гепатит С во многом зависит от правильности сбора и транспортировки биоматериала:

  • забор крови осуществляют в условиях процедурного кабинета;
  • пользуются только одноразовыми стерильными шприцами;
  • для исключения заражения биоматериала соблюдают правила асептики и антисептики.

Контейнер с пробой маркируют в присутствии пациента, после чего отправляют в лабораторию.

Читать еще:  Показатели алат и асат при гепатите

Как выполняют подсчет вирионов

Во время количественной ПЦР возбудителя идентифицируют путем обнаружения РНК в плазме крови. Это возможно за счет удвоения участка нуклеиновой кислоты вируса в среде фермента РНК-полимеразы. Во время анализа копируются (амплифицируются) только определенные участки генома.

Подсчет количества РНК вируса гепатита осуществляют в 3 этапа:

  1. Выделение генетического материала. Чтобы очистить вирусную РНК от крови и белковых включений, биоматериал пропускают через сорбенты, отмывают в растворе, центрифугируют, а потом обезвоживают. В результате остается осадок с вирусными частицами, который растворяют в специальной жидкости. На выходе получается РНК вируса гепатита в элюенте.
  2. Амплификация. Анализ выполняется в приборе-термостате, в котором периодически подогревают и охлаждают пробирки. При одном исследовании делают до 35 циклов, состоящих из 3 фаз: денатурация (разрушение) РНК, отжиг и синтез нуклеиновых кислот матричной цепи. За несколько десятков циклов в пробирке образуется множество фрагментов РНК, достаточное для подсчета количества генетического материала.
  3. Электрофорез. Пробирку с копиями вируса гепатита помещают в агарозный гель. Образец подключают к источнику тока, под действием которого фрагменты РНК разделяются. Благодаря электрофорезу копии нуклеиновых кислот становятся различимыми в свете ультрафиолета. Затем с применением специального оборудования подсчитывают количество РНК вируса.

В настоящее время для определения уровня виремии все чаще проводят ПЦР-диагностику в реальном времени (Real-Time PCR). В отличие от стандартного анализа, в образец крови вводят раствор с флуоресцентными метками. Благодаря этому удается подсчитать количество амплифицированной РНК ВГС в реальном времени после каждого цикла.

Результаты количественного определения РНК

Количественная оценка позволяет судить об уровне виремии, то есть активности вирусного процесса. С учетом результатов анализа гепатолог подбирает дозу лекарства, определяет продолжительность терапии гепатита С.

Расшифровка количественного анализа на гепатит С:

Данные количественной ПЦР, в МЕ/мл Трактовка
не обнаружено вариант нормы, вируса в крови нет
менее 150 содержание РНК ниже линейного диапазона концентраций, минимальная вирусная нагрузка
150-3*10 4 низкий уровень виремии
от 3*10 4 до 8*10 5 средняя вирусная нагрузка
более 8*10 5 содержание РНК ВГС выше линейного диапазона концентраций

Вирусная нагрузка – важный показатель, который учитывается при разработке схемы терапии. Если уровень виремии минимальный или низкий, прогноз течения гепатита и результативности ПВТ благоприятный. Ситуация ухудшается при средней и высокой вирусной нагрузке. Такие пациенты подвержены осложнениям – фиброзу, жировому гепатозу, циррозу.

Уровень виремии не отражает степень повреждения печеночной паренхимы или тяжесть течения гепатита. Чтобы определить серьезность изменений в печени, прибегают к инструментальному обследованию – фибросканированию, биопсии и гистологическому анализу.

Сколько по времени делается качественный и количественный анализ и примерная цена

Чтобы провести исследование на гепатит С (качественный и количественный ПЦР-анализ), посетите лабораторное отделение поликлиники, частную клинику или лабораторию. Стоимость диагностики в Москве зависит от:

  1. типа анализируемого биоматериала;
  2. чувствительности применяемой тест-системы;
  3. количества определяемых инфекций.

Примерная стоимость лабораторного анализа

Тип анализа Цена в рублях
забор крови 170-200
качественная ПЦР 750-1000
количественная ПЦР (реал-тайм) 3800-4000
генотипирование 1350-1400

Анализ ПЦР на гепатит С делается не более 3 часов. Забрать окончательные результаты можно уже в течение 1-2 суток.

Бывает ли ложный результат

Генетический материал возбудителя гепатита выявляется в крови спустя 1.5 недели после заражения. До этого периода содержание РНК ВГС в крови так мало, что ее нельзя обнаружить в лабораторных условиях. Для оценки вирусной нагрузки рекомендуется пользоваться высокочувствительными тест-системами: 150-1*10 8 МЕ/мл.

ПЦР-диагностика – исследование, достоверность результатов которого достигает 97-99%. Искажение данных возможно при:

  1. игнорировании правил подготовки к исследованию;
  2. нарушении требований антисептики;
  3. несоблюдении методики анализа крови;
  4. неправильном заборе и хранении биоматериала.

Перед обследованием пациент должен сообщить врачу о приеме медикаментов, так как их компоненты могут влиять на активность возбудителя и результаты исследования.

ПЦР-диагностика – высокоточное исследование, при котором определяют наличие и количество копий возбудителя инфекции. Получение ложноотрицательных результатов почти невозможно. Погрешности выявляются в единичных случаях при диагностике хронического гепатита вне обострения.

Количественный анализ на гепатит Ц

Ведущий метод диагностики воспаления печени — количественный анализ на гепатит С. Определение болезни подразумевает проведение количественного, качественного анализа с проверкой генотипа вируса, что дает возможность определить основные параметры течения заболевания. Ввиду способности к мутации требуется точное и своевременное диагностирование с правильно расшифровкой данных для разработки терапевтической схемы.

С 2012 года болезнь гепатита C официально считается полностью излечимым заболеванием. Но для этого важна своевременная диагностика.

Что такое ПЦР?

Полимеразная цепная реакция или же ПЦР — метод, позволяющий выявить гепатит на начальных стадиях. Чувствительность немного ниже ИФА. Метод определяет ДНК- фрагменты вируса в пробе крови пациента даже в малых количествах. Исходя из этого врач правильно вычисляет именно возбудителя инфекции, а не его продукты жизнедеятельности. По результатам анализа ПЦР есть возможность выявить даже следы вируса и его генотип.

Видовое разнообразие анализов

В ПЦР выделяют 3 вида анализа:

  • Качественный. ПЦР гепатита С, который основывается на поиске иммуноглобулинов (антител) типа M и G, характеризующих факт заражения. Анализ может выдать — «не обнаружено», что будет считаться нормой.
  • Количественный. Подтверждает диагноз, позволяет контролировать лечение, указывает на риск заражения других людей. Определяется количество в международной системе единиц — МЕ/мл. Показатель рассчитывается из количества РНК-вируса в 1 мл пробы крови. Высокий результат указывает на повышенный риск инфицирования других людей.
  • Генотипирование. Метод, основывающийся на выявлении генотипов HCV, которых насчитывается 7.

Перед сдачей крови на проверку важно придерживаться правил:

  • За 8 часов до анализов в последний раз покушать.
  • Не пить спиртного за 2 дня, желательно не курить в это время или хотя бы за 1—2 часа до.
  • Сообщить о приеме лекарств.

Вернуться к оглавлению

Показания к применению

Для проведения количественного метода исследования нужен ряд показаний, без которых эта диагностика невозможна. К ним относится:

  • выявление качественным анализом антител РНК-вируса;
  • присутствие хронического или острого вида заболевания;
  • планирование тактики лечения;
  • обнаружение микст-гепатитов при диагностировании.

Вернуться к оглавлению

Как проводится количественный ПЦР?

Определение концентрации патогена — суть исследования. Диагностика определяет степень тяжести заболевания, что позволяет полностью увидеть клиническую картину болезни. С помощью это вида ПЦР обнаруживают, какая вирусная нагрузка при гепатите С. После проведения расшифровки полученных данных анализа, врачи назначают лечение, в ходе которого делают забор крови на 4, 12, 16 и 24-й неделях. По завершении 12-й должно быть улучшение, в обратном случае метод лечения стоит заменить.

Расшифровка

Найденное в крови количество HCV, влияет на вероятность, с которой вирус гепатита передается окружающим — чем выше, тем больше вероятность. За счет этой процедуры составляется правильный план дальнейшего лечения. Полученные в ходе процедуры результаты измеряются в единицах МЕ/мл и копий/мл. Расшифровать показатели можно только после пересчета полученного количества с учетом коэффициента (КП). Есть 2 метода:

  • HCV Monitor с КП в МЕ — 2,7;
  • LCX HCV RNA с КП — 3,8.
Читать еще:  Симптомы при гепатите с у мужчин фото

Чтобы расшифровать генотип вируса, используются латинские или римские цифры с буквами. Каждая модификация патогена имеет свои особенности, что определяют дальнейшую схему лечения. Бывает, что у пациента по методу ПЦР не обнаружено антител в крови, а ИФА показывает, что они есть. Тогда говорят, что больной переболел острой формой гепатита С с самоизлечением.